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我们知道,尿液有形成分检查离不开应用显微镜。自从广泛使用显微镜技术检查尿液以来,对尿液的形态学研究已经有了明显的进展。现代显微镜检查技术已经不仅限于使用光学显微镜检查,显微镜检查技术可以使得进行肾脏疾病研究的肾脏病学家和检验专业人员,利用各种显微镜光学技术轻易识别尿沉渣中的各种成分。现代多功能显微镜均可选择多种视场照明模式,我们应该了解他们不同的特点,正确使用。 现代高端的多功能显微镜往往会配备不同的组件来处理我们所需要研究和鉴别的成分,这样我们可以在同一个视野下,通过切换不同的光源组件进行照明,来达到观察和鉴别的目的。可以使得研究肾脏病的专业人士能够使用各种照明技术轻易地识别尿沉渣的成分。而同时配合有显微镜数字相机时,更可以将所发现和观察到的形态学成分,在不同照明光源条件下拍摄和记录下来,方便进行对比研究与分析。本文对尿液有形成分检查常用的几种照明技术进行介绍,以便大家学习和了解,充分发挥显微镜的特殊功能。 2.暗视野:检验专业领域所指的暗视野显微镜,是采用暗场(Dark-field)照明技术(图2),在大多数显微镜上也可用,在多功能显微镜下面的聚光镜中安装有一个不透明的暗视野盘片。在这种模式下,只有来自光源的周边的光聚焦在样本上,在黑暗背景下产生明亮的图像。高折射率沉淀物中的晶体和脂类等成分在暗场照明条件下显得格外“明亮”。使用暗视野功能应将聚光镜转盘设置为“DF”模式。 3.相位差:显微镜如果具有相位差(Phase contrast)功能,通过在聚光镜中使用“相位环(“phase annulus)”和物镜中使用反向“相位板(phase plate)”来改变光的路径(图3)。这种效果会增强物体边缘和低折射率元素的对比度(如管型中的透明蛋白基质)。这种成像方式需要一个装有特殊聚光镜和特殊相位对比物镜的显微镜。根据使用的物镜,将聚光镜上的转换盘设置为“Ph1、Ph2或Ph3”模式即可。 4.偏振光:在使用偏振光显微镜中(图4),将一个偏光滤光片(偏光镜)放在聚光镜下面,另一个(偏光镜)放在样品上方的光路中(通常在物镜和观察镜之间的特定位置插入)。当将位于下面聚光镜上的偏振光镜片相对于插入到上面的偏光镜片进行旋转,当旋转90°时,所有偏振光被阻挡,图像背景看起来非常暗。光穿过载玻片上的各类具有屈光差的物体(如脂类、晶体和各种干扰成分)可呈现出双折射现象,这意味着光在两个方向上折射。额外的折射光能够通过显微镜的光学分析,从而在原本黑暗的背景下形成对比鲜明的物体。换句话说,图像对比度是由平面偏振光与双折射(或双重折射)样品相互作用产生的,产生两个单独的波分量,每个分量在相互垂直的平面上起偏振。 通过偏振光显微镜镜检技术很容易鉴别脂类、晶体和污染物,如淀粉和合成纤维。某些脂类显示出一种特征性的“马耳他十字(maltese cross)”现象,这种模式对于鉴别尿液中的脂质非常有用(图6)。 注:本文来源于《临床实验室》杂志2021年第4期“临床检验”专题 |