• 红细胞上用于 PNH检测的锚连蛋白主要是CD59和CD55；
• 而CD55在红细胞的表达较低，已不建议使用CD55进行临床检测。
  

PNH-FCM检测的特殊点在于检测的目的细胞是锚连蛋白和GPI锚蛋白阴性的细胞群。

• 必须使所有阴性群体显示在图中，细胞全部可视，不要压坐标轴。
• 尽量不使用双指数散点图。
• PMT调节需要选择合适的靶细胞，对红细胞来讲，选择未染色红细胞。
  

红细胞检测不需要溶血，但要防止红细胞聚集。

由于蛋白质会引起红细胞聚集。

白细胞是检测PNH克隆大小最精准的目标细胞，用于确定疾病的发展程度。

检测白细胞GPI相关锚蛋白最好的试剂为嗜水气单胞菌溶素变异体（FLAER），应选择适当的锚连蛋白抗体同时与FLAER及设门抗体联合应用。

• CD15是粒细胞通用的抗体。

• 对于单核细胞的设门标志的选择国际上推荐CD64

• 主要原则同红细胞，注意选择TIME参数及FSC及SSC信号均选择线性模式。

• 由于部分患者出现血管内溶血，使得红细胞的PNH克隆比例往往比实际低，不能真实反映疾病程度。

• 白细胞PNH克隆比例尤为重要。

• 高灵敏度FCM可以发现PNH小克隆、识别PNH表型特点。

• 量化克隆的大小以及明显降低假阳性率。

高灵敏度PNH克隆检测时，获取的细胞数、检测的背景值及仪器的洁净度等决定检测的敏感度。

• 导致假阳性的原因主要有：红细胞碎片、非特异性染色、自发荧光、携带污染及错误数据的出现。
  

• 通过获取足够多的细胞，结合细胞表型特征和多参数分析可以增加门内细胞的纯度而避免假阳性的产生。

• 虽然红细胞检测能明确具体是哪型GPI缺失，但缺失的百分比和临床表现的关系尚未明确。

• 值得一提的是：随着依库珠单抗（eculizumab）在临床的使用，红细胞 PNH检测也能用来监测其治疗效果。

• 目前缺乏相应的商品化室内质控物；

• 国内临床检验中心也未开展相关的室间质评；

• 专家共识建议由开展PNH流式检测的区域中心单位牵头进行室间比对。