本文转载自 检验医学网
前白蛋白（PA）是完全由肝脏合成的一种蛋白，其半衰期短，仅1.9d。当肝脏发生疾病时，血清PA浓度会迅速下降，且它的浓度受临床治疗药物和方法的影响较小，是反映肝脏合成功能的一个敏感和特异性指标，且是较ALB、胆红素及r球蛋白等更敏感和准确的指标。
研究显示[1]，各种类型肝病的PA都比正常水平低，而且越严重的肝病类型其血清PA的量越低。重型肝炎患者PA越低，病死率越高，且随着病程进展，血清PA值明显升高者预后好，血清PA值无升高或继续下降者预后差[2]。
PA是加快肝细胞合成与分泌的加速运转蛋白之一，而其主要功能是转运甲状腺素与维生素A，并具备胸腺激素活性，能通过加快淋巴细胞成熟增强人体免疫力。当PA<100mg／L时，应考虑患有肝硬化[3]。近年来有大量研究[4]表明，脓毒症严重程度与CRP水平呈正相关，与PA水平呈负相关。在脓毒症患者病程中，动态监测CRP／PA比值变化，若其水平持续升高，提示患者感染未控制，机体免疫功能差，蛋白质营养不良，预后不佳[5]。有研究显示：血清PA／总胆红素比值是肝衰竭患者的独立预后因素，对肝衰竭患者的预后预测具有较好的临床判断价值[6]。血清PA测定可作为鉴定肝硬化代偿期与失代偿期的指标[7]。综上所述，血清PA是反映肝脏损害及储备功能较理想的指标，同时也是脓毒症的重要监测指标，血清PA的降低具有重要临床意义。一日生化组值班老师跟笔者反映，有一个标本的前白蛋白(PA)测定值为负数，问笔者是不是因为PA的浓度偏低所以才检测出来是负数？笔者当时在查看了PA的反应曲线后发现，反应曲线显示有明显的干扰，见图1。
在AU5800生化分析仪上，PA采用的是双试剂终点法，检测原理为免疫比浊法，反应方向为正反应（反应启动后吸光度会上升），P0、P1点为R1试剂和样本的加入点，两者加入比色杯后会孵育一段时间，在P10点加入R2试剂启动反应，在P27点反应达到平衡，在进行吸光度计算时，会用P27的吸光度减去P10的吸光度。图1显示在P1至P10点吸光度异常偏高，在P10点加入R2试剂后吸光度没有上升反而迅速下降，所以P27的吸光度在减去P10的吸光度后为负值，最后得到的PA的浓度也为负值。P1到P10这段时间内检测体系中只有样本和R1试剂，异常偏高的吸光度显示标本中存在某种干扰。笔者检查患者的生化结果发现，其甘油三酯的结果为10.2mmol/L，考虑为脂浊干扰引起的反应曲线异常。于是将样本进行高速离心后再测，结果依然为负数，干扰不能消除。于是笔者想到两种可能，一是曾经有文献报道，免疫球蛋白对前白蛋白的检测有干扰[8]；二是单纯的高速离心对脂浊干扰消除力度不够。于是笔者准备了两份高速离心后的标本，一份用于类风湿因子和免疫球蛋白的测定，一份进行稀释后测定[9]。结果类风湿因子和免疫球蛋白的浓度均正常，而稀释3倍后测得的标本依然为负数，曲线显示干扰依然存在，但是其反应吸光度是正值（见图2），正常情况吸光度为正值，其结果不应该为负值，出现这种情况，说明最后得到的这个反应OD值比0浓度的OD值还低。
于是笔者考虑可能是定标曲线出现了问题，在检查定标曲线后发现PA的定标浓度有5个，其最低的一个为150mg/L，0点为定标曲线的延长点，0点有截距（即0点的OD值为正值且远高于0），见图3。
因为从150到0这段定标曲线为实际定标曲线的自动延长，且150的值相对偏高，笔者想到将定标浓度增加一个0mg/L，重新定标的曲线更加真实，于是笔者将PA的定标类型从5AB改为6AB，定标公式为Spline，将生理盐水作为0浓度的定标品进行6点定标，0点的OD值为-0.0002，接近0，定标曲线见图4。
重新定标后，笔者将高速离心后的标本进行10倍稀释（前面稀释3倍依然干扰明显）重测，反应曲线可见干扰消除， 最后测得浓度为319mg/L，反应曲线见图5。
一般情况下，我们会认为0浓度的吸光度为0，定标曲线会从原点穿过。但AU5800在多点定标，采用Spline的定标公式时，定标曲线表现为曲线，如果没有设置0点的定标品，定标曲线在延长时往往是不会通过坐标轴的原点，最好是能设置0浓度定标点。且相对PA这个项目来说，其成人参考范围为200-400mg/L，儿童的为成人的一半，该试剂盒配的最低浓度的校准品为150mg/L，接近参考范围下限，如果没有0浓度定标品，笔者认为对于低于150mg/L的标本检测准确性也是存在一定的风险，而低于150mg/L的浓度是PA具有临床意义的浓度。
最后，笔者考虑定标方式的改变可能会改变试剂盒的性能指标，特别是线性范围下限的改变。试剂盒声明的线性范围下限为30mg/L，标本在经过10倍稀释后很可能会低于30mg/L，同时因为增加了0浓度的定标品，也会改变线性范围的下限，笔者需要对线性范围进行重新确认。因受一些客观条件的限制，暂时无法进行确认，笔者在进行精密度、正确度验证以及两种定标曲线下标本比对均合格后，将150mg/L的定标品和一个浓度为105mg/L的标本进行10倍稀释后，重复测定20次，得到的重复性CV均小于3%，得到的平均值与原始浓度的偏移一个为-15%，一个为-19%，PA的TEA为25%，重复性和偏移均在可接受范围内。
