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背景 目的 方法与步骤
50株粘菌素耐药(n=32)和敏感(n=18)肺炎克雷伯菌分离株。
由 Liofilchem™ComASP™粘菌素测试组(Liofilchem,Roseto degli Abruzzi,Te,Italy)使用 BMD 方法对临床分离株进行粘菌素敏感性试验，该方法含有27倍稀释 (0.25–16mg/L) 的抗生素。根据 EUCAST 临床折点 (V12.0，2022) 判读 MIC 结果。
1. 使用PCR方法测定肺炎克雷伯菌mcr基因的缺失或者突变情况； 2. 将所有肺炎克雷伯菌菌株在麦康凯琼脂平板 (bioMérieux) 上于37℃下传代培养24h；使用生长的菌落制备0.5McF菌悬液。除接种量外，按照标准程序进行 ComASP(Compact Antimicrobial Susceptibility Panel) 粘菌素试验。 3. 在37℃下孵育3h后，取1μL菌悬液点样至靶板，干燥后，滴加裂解液和基质溶液，干燥后在Autof 1000 MS上使用“微生物”自动采集模式进行校准和鉴定。 4. CORE数据分析 A定性分析：根据以下参数将检测标本归类为耐药（colR）或敏感（colS）：MALDI-TOF MS评分<6.0=S，≥6.0=R。 B定量分析：在0.25–16mg/L范围内获得的所有质谱评分与对照组质谱评分一起纳入分析中。MIC值确定为质谱评分<6的最低药物稀释度。报告所有样本的平均值 (G mean) 和根据重复样本计算的模态MIC。如果是16mg/L质谱评分>6，报告MIC值>16mg/L，测试样本归类为colR。相反，在0.25mg/L质谱评分<6的情况下，报告MIC值<0.25mg/L，并将样品归类为colS。 根据上述定性或定量CORE试验的算法对每种菌株进行分类。在使用粘菌素的EUCAST临床折点 (V12.0，2022) 进行解释后，将结果与常规BMD试验获得的结果进行比较。 结果 通过 MALDI-TOF MS 分析的简单算法（MALDI-TOF MS评分<6.0=或≥6.0=R），定性 CORE 测定结果和样本表型总体一致，CA（分类一致性）=100%。此外，在 colR 和 colS 分离株的定量 CORE 试验中， EA（基本一致性）分别达到93.7%和83.3%。 根据本次50例肺炎克雷伯菌分离株的 PCR检测、BMD试验、MALDI-TOF MS 鉴定的结果进行 CORE 分析，可在3h内为临床医生提供药敏结果，而无需等待常规 BMD 分析所需的16-24h。此外，使用 MALDI-TOF 在正离子模式下获得粘菌素耐药表型检测的可能性，无需切换到负离子模式，既避免了校准步骤，又验证了 CORE 方法适用于当前常规的 MALDI-TOF MS 鉴定工作流程。 综上所述，全自动微生物质谱检测系统不仅广泛应用于微生物鉴定，而且可以实现快速鉴定肺炎克雷伯菌粘菌素耐药/敏感菌株！为进一步扩大 MALDI-TOF MS 在快速药敏检测领域的应用提供了依据；为高致病病原体、高耐药病原体的快速药敏/耐药表型检测拓展了新的方向！ 全自动微生物质谱不仅用于粘菌素耐药表型的快速检测！同时可检测MRSA、ESBLs、CRE、CRAB、CRPA、VRE等耐药表型，及各种酶型如KPC、OXA、NDM、VIM等；助力细菌耐药防控！ |