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检验科每天都要检测非常多的血常规标本，其中血小板计数是常用的止凝血功能筛查指标之一。在使用血液分析仪进行血小板（PLT）计数时，当出现数量图形异常或报警提示，应使用显微镜或者流式细胞仪对血小板计数进行复核。ICSH（国际血液学标准化委员会）推荐流式细胞术作为血小板计数参考方法，并用于其他计数方法的溯源。 参考方法是一种什么方法？ 参考方法是一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供高度准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。 流式细胞术进行PLT计数的原理是什么？ EDTA抗凝血标本中血小板用血小板特异的荧光抗体进行染色，用流式细胞仪检测红细胞（RBC）和PLT比值，再用RBC计数值除以RBC/PLT比值计算出PLT计数值。 做PLT计数参考方法实验前应注意什么？ 01 标本中不能有肉眼可见的溶血或小凝块，室温下4小时内完成检测。实验前轻柔地充分混匀标本，保证RBC和PLT分布的均一性。 02 PLT约2μm左右，流式细胞仪对FITC标记直径为2μm的球形颗粒时必须有足够的敏感度。 实验中还需要注意什么? ●在标本检测中使用聚丙烯或聚苯乙烯容器，不得使用玻璃容器，避免血小板黏附于容器上。 ●使用FITC标记的CD41和CD61抗体，这两种抗体可以与血小板膜糖蛋白GPIIb和IIIa形成复合物，用于检测PLT。需确认抗体可以将PLT从噪声、碎片和RBC中分辨出来。 ● 用流式细胞仪检测时，应至少检测5000个信号，其中PLT（下图R1门所示）应多于1000，仪器设定保证每秒少于3000个信号。对于同时收集到RBC散射光和PLT荧光信号（下图R4门所示），应被视为重叠，计数结果将分别计入RBC和PLT。 实验后如何计算得出血小板计数？ ①红细胞浓度计数具体参照中华人民共和国卫生行业标准WS/-845-2005年红细胞和白细胞计数参考方法。 ②用RBC数除以RBC/PLT的比值得到PLT计数值。 ③要求PLT计数参考方法检测结果的不精密度（CV）≤3%。 如果PLT计数不正确，可能的原因是什么？ ●此方法仅得出PLT和RBC比值，要获得PLT计数正确结果，还应同时保证RBC计数准确性。 ●下表列出PLT计数参考方法潜在的干扰情况：  |